2022-05-09
来源: 贝登医疗
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PCR技术的本质是体外核酸扩增、加热裂解链双链DNA、在退火温度下与模板DNA杂交、Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2、在适当pH缓冲液存在下引物扩张、"变性退火引物扩张"过程重复25 ~ 40次,待测样品中核酸的拷贝数呈指数级扩增。今天,小编主要与大家谈谈常用PCR仪用途作用。
1.普通PCR仪
一次PCR扩增只能运行一台特定退火温度的PCR仪,也称传统PCR仪。
PCR仪用途作用:主要是在单一退火温度下对目的基因做一些简单的扩增。
(1)梯度PCR仪器:可以根据PCR放大值设置不同的退火温度条件,一般具有12个温度梯度的普通PCR仪器。用途:研究未知DNA退火温度的放大。
(2)原位PCR:是利用具有细胞定位功能的原位杂交技术对细胞内目标DNA进行定位分析,实现细胞内基因扩增的普通PCR仪器。
PCR仪用途作用:用于细胞靶DNA位置的基因扩增。
2. 实时荧光定量PCR仪
PCR扩增中加入的引物用荧光素表示,使引物和荧光探针能够与模板特异性同时结合。扩增结果由荧光信号采集系统实时采集,发送到计算机分析处理系统,实时输出定量结果。
实时荧光定量PCR仪可分为单通道、双通道和多通道。当只有一个荧光探针用于标记时,选择单通道;当有多个荧光标记时,使用多个通道。单通道还可用于检测大象基因的多荧光标记和表达产物。因为一次只能检测大象基因的扩增量,所以要多次扩增才能检测出不同目的的基因片段量。多通道有助于多PCR,可以同时检测多目的基因。
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